Test Hipoosmótico en el Caballo


La prueba hipoosmótica evalúa si la membrana espermática es funcional y para ello se basa en la capacidad de los espermatozoides de funcionar como osmómetros. Como tales, si se los coloca en un medio hipoosmótico, los espermatozoides bioquímicamente activos incorporan agua de forma activa en el citosol. Los espermatozoides que possen una membrana plasmática funcional presentan “swelling” o endósmosis (cambios morfológicos en la cola típicas del engrosamiento sufrido asociado con la inflamación citosólica al incorporar agua) porque mantienen la capacidad de incorporar agua para equilibrase con el medio que los rodea. Una solución hipoosmótica optima debería ejercer un estrés osmótico suficiente como para aumentar el volumen celular de forma observable pero sin provocar la lisis de la membrana espermática.

Material y métodos

En un vial, se adiciona 1mL de la solución hipoosmótica [100 mOsmol/L] compuesta por fructosa y citrato de sodio preparado en agua bidestilada, y se mezcla con 1,1mL del botón que se  obtiene del lavado de los espermatozoides. Esta solución (mezcla) se incuba a 37ºC por un tiempo de media hora.
Para medir hinchamiento espermático, se coloca una gota de la mezcla sobre un portaobjetos y se tapa con un cubreobjetos para observar bajo microscopio óptico o con microscopio de contraste de fase a 400x (utilizando el objetivo de 40x). La proporción total y los diferentes patrones de hinchamiento se calculan dividiendo el número de células reaccionadas por 100 sobre el total de espermatozoides contados en la muestra.

Patrones observables, semen fresco y semen congelado
SS: Espermatozoides sin swelling (membrana citoplasmática dañada).
A-F: Espermatozoides con swelling (membrana citoplasmática funcional). (Semen fresco)